京都大学本科生研究团队 iGEM Kyoto 的成员 Alexander Y. Liu、Hiroto Koga 和 Chihiro Aiya 开发了一种用于 DNA 克隆的新反应混合物。 仅通过混合两种酶,成本是昂贵试剂的千分之一。性能与商业产品相似。
DNA克隆是分子生物学的核心技术,需要用“剪刀”和“胶水”切割DNA的复杂过程。最近,使用了一种基于“同源重组”的简单方法,但对昂贵试剂的需求给许多实验室的预算带来了压力。
由于预算有限,研究团队对购买昂贵的试剂犹豫不决,并开始思考“我们可以自己创造一种新的反应溶液吗?”着眼于报道“同源重组”可以通过使用“SLiCE”来实现,“SLiCE”是一种使用特殊方法从大肠杆菌中提取的溶液,而无需使用昂贵的试剂。
研究表明,核酸外切酶 III (ExoIII) 和核酸外切酶 T (ExoT) 两种酶负责该活性。 通过简单地混合两种酶,我们成功地完全再现了 SLiCE 的活性,其中溶解了无数蛋白质。负责主要活动的 ExoIII 是市售的,但由于它被稀释和使用,如果您购买 2 日元的试剂,则可以进行 2 次重组反应(市售试剂盒每次反应约 80 日元。) .以极低的成本制作可与昂贵的试剂盒相媲美的鸡尾酒(混合物)已经成为可能。
制备的鸡尾酒可以在非常稳定的条件下储存,即使长期储存后活性也不会降低。这一成就有望显着降低全球 DNA 克隆的成本。